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本篇帶你了解一下中壓層析柱過柱時的技巧

更新時間:2024-08-08      點擊次數(shù):1273

  中壓層析柱是凝膠層析技術(shù)中的主體,一般用玻璃管或有機玻璃管。根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數(shù)不同,從而分離的一種層析法。

  它的直徑大小不影響分離度,樣品用量大,可加大柱的直徑,一般制備用凝膠柱,但在加樣時應(yīng)將樣品均勻分布于柱床面上。

  此外,直徑加大,洗脫液體體積增大,樣品稀釋度大。分離度取決于柱高,為分離不同組分,柱床必須有適宜的高度,分離度與柱高的平方根相關(guān)。

  主要特點與優(yōu)勢

  1.高分離效率:在中壓條件下,流動相的流速加快,從而提高了分離效率,尤其適用于快速純化需求。

  2.良好的生物兼容性:采用醫(yī)療級聚丙烯材質(zhì),對生物樣品具有良好的兼容性,減少了樣品污染和損失的風險。

  3.靈活適用性:中壓層析柱可以裝填免疫親和、離子交換、凝膠過濾和反相等多種層析介質(zhì),使其能夠廣泛應(yīng)用于抗體、蛋白和其他生物分子的純化。

  4.串聯(lián)使用能力:多個中壓層析柱可以串聯(lián)使用,進一步增強純化性能,滿足更復(fù)雜的純化需求。

  應(yīng)用領(lǐng)域

  1.蛋白純化:廣泛用于抗原抗體、重組蛋白的純化,如使用CommaX™ rProtein A, G, A/G預(yù)裝柱進行抗體純化。

  2.核酸純化:適用于核酸的分離和提純,特別是對于那些需要高純度核酸的應(yīng)用。

  3.多肽和其他分子的純化:還可用于純化多肽和其他小分子,如使用CommaX™ His純化預(yù)裝柱進行標記蛋白純化。

 

  

  下面讓我們一起來了解一下中壓層析柱過柱的技巧吧:

  按過柱時的壓力可以分為:加壓,常壓,減壓。壓力可以增加淋洗劑的流動速度,減少產(chǎn)品收集的時間,但是會減低柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時候,常壓柱是效率較高的,但是時間也較長,例如一些天然化合物的分離,有時一個柱子過幾個月也有可能。

  減壓柱能夠減少硅膠的使用量,但是由于大量的空氣通過硅膠會使溶劑揮發(fā),有時會在柱子外面有水汽凝結(jié),另外有些比較易分解的東西可能得不到,而且還必須同時使用水泵抽氣,噪音大,時間長,所以減壓過柱用得比較少。

  加壓過柱是一種比較好的方法,與常壓柱類似,但用外加壓力可以使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣,雙連球或者小氣泵(用魚缸供氣的加壓泵就行)。特別是在容易分解的樣品的分離中很適用。

  一般壓力不可過大,不然溶劑走的太快就會減低分離效果。因為加壓過柱效率高,分離效果較好,所以加壓過柱在普通的有機化合物的分離中是非常適用的。

  一些低沸點溶劑裝柱時往往會在柱子中產(chǎn)生氣泡,使柱子變花,利用加壓過柱法在裝柱時就可以有效地解決這個問題,而且可以使柱子很快裝實。

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